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• Les instructions

Lorsque vous étudiez en microbiologie de niveau supérieur, votre enseignant peut vous demander de mener à bien un projet dans lequel vous devez identifier une bactérie inconnue au moyen d’une série de tests. Pour identifier correctement cette bactérie, il est nécessaire de disposer de tout l'équipement de laboratoire approprié et de connaître les différentes procédures de laboratoire. Il est également avantageux de disposer d’un organigramme des bactéries et de leurs tests de laboratoire afin de pouvoir identifier vos bactéries.

Les instructions

Les plaques de culture permettent aux bactéries d'être isolées pour identifier facilement leurs caractéristiques (Hemera Technologies / Photos.com / Getty Images)

1. Préparez tous les tests avant de commencer l'expérience. Cela comprend la préparation des plaques et des tubes d'agar ainsi que la préparation des indicateurs nécessaires, tels que le réactif de Kovac. Étiquetez tous les tubes et les plaques de manière appropriée afin qu’ils ne se mélangent pas, ce qui entraînerait des résultats erronés.

2. Semez vos bactéries. Cela déterminera la forme et la couleur de votre bactérie, telles que gram positif (violet), gram négatif (rouge ou rose), noix de coco (circulaire), spirochètes (spirale) ou bâtonnets. Pour semer votre bactérie, vous aurez besoin d'une lame propre, d'eau, de violet cristallisé, d'iode, d'eau de javel, de safranine, de papier absorbant, d'un microscope optique et de serviettes en papier. Après avoir flambé la boucle, utilisez-la pour déposer une goutte d’eau sur la lame. Flambez à nouveau la boucle et placez une petite quantité de votre bactérie inconnue dans la goutte d'eau. Passez la lame sur la flamme plusieurs fois pour qu'elle sèche et attachez complètement les bactéries à la lame. Recouvrez-le de violet cristallisé, laissez-le pendant une minute, puis lavez-le doucement. Puis couvrez la lame avec de l'iode. Laisser agir pendant 30 secondes puis laver. Placez un morceau de papier absorbant sur la lame pour éliminer l'excès d'eau. Puis verser l'eau de Javel sur la lame. Après cinq secondes, lavez pour enlever l'eau de Javel. Enfin, recouvrez la lame de safranine. Après 40 secondes, lavez la lame et séchez-la doucement avec une serviette en papier. Placez une goutte d'huile sur le site de la bactérie sur la lame et regardez sous le microscope. Notez la forme et la couleur des bactéries visibles.

   
   

3. Testez l'oxydase dans vos bactéries. Pour cela, vous aurez besoin d’un filtre en papier, d’un réactif oxydase, d’E. Coli, de Pseudomonas et de ses bactéries inconnues. Dans ce test, E. coli et Pseudomonas sont les témoins. Votre bactérie doit avoir moins de 24 heures pour ce test. Flambez la poignée et placez une petite quantité de chaque bactérie sur un morceau de filtre en papier. Utilisez un compte-gouttes pour placer une goutte du réactif oxydase dans chaque bactérie. Après 10 secondes, notez la couleur de chaque bactérie. E. coli donnera un résultat positif et Pseudomonas donnera un résultat négatif. Les bactéries positives pour l'enzyme cytochrome oxydase deviendront violettes et les bactéries négatives ne changeront pas de couleur.

4. Test de sulfure d'hydrogène (SIM). Flick la poignée et utilisez-le pour ramasser des bactéries de la plaque. Inoculez le tube SIM avec vos bactéries et couvrez-le. Laissez ce tube au four pendant 18 à 24 heures à 37 ° C. Identifiez si votre bactérie est mobile (a flagellum). S'il y a croissance et nébulosité loin de l'endroit où vous avez inoculé la bactérie, celle-ci est mobile. Ensuite, placez deux gouttes de réactif Kovac dans le tube. Si sa couleur change en rouge ou rose, sa bactérie est positive pour ce test et contient du tryptophane, ce qui en fait un producteur d'indole. Si le tube devient noir, ses bactéries produisent du sulfure d'hydrogène.

   
   

5. Effectuer un test de citrate Simmon. Inoculer les bactéries dans deux éprouvettes avec de la gélose de Simmon. Laissez-les au four pendant 18 à 24 heures à 37 ° C. La gélose est initialement verte, mais si vos bactéries utilisent du citrate comme source de carbone, la couleur passera du vert au bleu. Le bleu est le résultat positif. Si les tubes restent verts, leurs bactéries sont négatives pour l'utilisation du citrate en tant que source unique de carbone.

6. Effectuer un test méthyl rouge (MRVP). Pour ce test, vous avez besoin de deux tubes contenant une solution de peptone, de tampons et de dextrose (ou glucose). Inoculer chaque tube avec la bactérie inconnue et remettre au poêle pendant 18 à 24 heures à 37 ° C. Lorsque vous êtes prêt, ajoutez trois gouttes de rouge de méthyle dans un tube. Ce sera votre tube MR. Si le tube passe du jaune au rouge, sa bactérie est positive et utilise une voie acide mixte au cours de la fermentation (production d'acide lactique, d'acide acétique et d'acide formique). Dans le second tube, ajoutez trois gouttes du réactif VP. Si le tube devient rouge, la bactérie est positive pour la formation de diacétyle, un produit de fermentation. Si le tube devient brun, votre bactérie est négative.

7. Trouvez vos bactéries en notant les résultats positifs et négatifs dans l'organigramme.