Contenu
La chromatographie en phase liquide à haute performance (CLHP) est une méthode courante d'analyse en laboratoire dans laquelle un échantillon est séparé en ses composants chimiques lors de son passage dans une colonne. Cette colonne est remplie d'un matériau poreux, typiquement du gel de silice. Une colonne standard en phase inverse, telle que C8, peut parfois se boucher ou être contaminée. Ces colonnes peuvent être récupérées en utilisant des techniques très simples.
Les instructions
-
Désengagez la colonne et inversez sa position, de sorte que la phase mobile entre maintenant par ce qui est normalement la sortie de la colonne. Fixez une sortie à l’autre extrémité de la colonne (qui était l’entrée originale) et laissez-la s’écouler dans une décharge.
-
Pompez une série de solvants par ordre décroissant de polarité. Une série de base recommandée consiste à commencer par le méthanol, puis à passer à l’acétonitrile, puis à l’acétonitrile / isopropanol (75:25), à l’isopropanol, au chlorure de méthylène et à l’hexane. Si la phase mobile qui était dans la colonne était absorbante, un passage avec de l'eau auparavant dans du méthanol est recommandé. Un débit de un à deux millilitres par minute est suffisant, et environ dix colonnes de volume de chaque solvant doivent être pompées. La colonne de volume est l'espace interne de la colonne et est calculée par (0,7 x pi x (DI / 2) ^ 2 x L), où DI est le diamètre intérieur de la colonne et L est la longueur.
-
Pompez dix autres volumes d’isopropanol à travers la colonne pour la préparer à l’utiliser avec la phase mobile d’origine. Si la phase mobile d'origine a été amortie, pompez également l'eau à travers la colonne après l'isopropanol, avant de revenir à la phase mobile d'origine.
-
Désengagez la colonne, inversez-la et engagez-la à nouveau pour qu'elle soit dans sa position d'origine (pour que la phase mobile entre dans le côté droit de la colonne). Reconnectez la sortie du haut-parleur au détecteur.
Récupérer la colonne
Comment
- Si ce processus ne nettoie pas complètement la colonne, un mélange 50:50 de diméthylsulfoxyde (DMSO) et de diméthylformamide (DMF) peut être utilisé. Les résidus de protéines et d'ions métalliques peuvent nécessiter d'autres types de solvants, tels que des réactifs épargneurs d'ions ou une solution d'acide éthylène diamine tétraacétique (EDTA).
Avis
- Dans certains appareils, la colonne vertébrale aura un tamis en métal rugueux comme une entrée. Dans ce cas, inverser la colonne permettra à la phase stationnaire de quitter la colonne, ce qui n'est pas recommandé. Consultez votre revendeur si vous n’êtes pas sûr.
- Le solvant utilisé dans ce processus est potentiellement toxique lorsqu’il est ingéré et inhalé. Utiliser les précautions de laboratoire normales lors de la manipulation.
Ce dont vous avez besoin
- Dispositif HPLC
- De l'eau
- Méthanol
- Acétonitrile
- L'isopropanol
- Chlorure de méthylène
- Hexane
