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La chromatographie liquide haute performance (HPLC) est un outil utilisé pour séparer les substances d'un mélange. La séparation et l'identification de certains produits chimiques se produisent principalement dans la colonne chromatographique du système. De nombreux types de colonnes sont disponibles pour CLAE, et chacun est utilisé pour un type d'analyse spécifique. La colonne C18 est la plus puissante non polaire généralement utilisée. Après une utilisation continue pendant une période de temps prolongée, le débit du solvant à travers celui-ci diminue et le temps d'analyse augmente. Une autre cause de la diminution du temps d'analyse est d'avoir des échantillons qui laissent de petites quantités de produits chimiques dans le matériau de la colonne, ce qui réduit la capacité de les séparer. La restauration de sa surface peut être effectuée en traitant le matériau avec une série de solvants spécifiques pour le nettoyer de tout échantillon restant et revitaliser le matériau de support.
Étape 1
Retirez la colonne C18 du sens d'écoulement et placez-la dans le sens opposé. Le retour du solvant atténuera l'effet d'accumulation qui se produit au fil du temps. Il faut veiller à ne pas laisser trop de matière s'accumuler à la fin de la colonne. Certaines usines utilisent un maillage plus grand en haut de sorte que lorsque le flux change de direction, le maillage est dans la position ci-dessous. Cette méthode de restauration est appelée inversion de flux. Pour empêcher l'accumulation de s'écouler vers le détecteur du système et éventuellement de provoquer une obstruction, laissez-le fonctionner sans le détecteur connecté et dirigez le flux de la colonne vers l'élimination.
Étape 2
Placer le tube de passage de solvant dans une série de solvants pour éluer tout composé retenu dans la colonne dans la direction opposée. Ces solvants varient dans leurs caractéristiques hydrophiles. En les faisant varier, vous éluez des composés de nature hydrophile tout aussi diverse. Utilisez successivement 50 ml de chacun des solvants suivants: eau (si vous utilisez un tampon), méthanol, isopropanol, dichlorométhane, hexane, dichlorométhane et isopropanol.
Étape 3
Replacez la colonne dans le bon sens et faites circuler votre solvant à travers. Utilisez au moins 75 ml pour le laver avant de continuer. Testez-le avec un modèle que vous avez utilisé lorsqu'il était neuf et vérifiez les résultats. Faites attention lorsque vous atteignez les points de rétention maximum et le temps d'analyse total. Le degré auquel ces attributs correspondent au test initial lorsqu'il était encore nouveau indiquera le degré de restauration de la colonne. Si les résultats ne sont pas satisfaisants, remplacez la colonne par une nouvelle et jetez l'ancienne.
